RNA研究篇(动物组织样本)

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快速从活体中获取目的组织后,快速用RNase-free水清洗去除血渍和污物,吸干表面液体,并快速将样品分割成50~100mg左右的小块液氮速冻后(除了保证RNA质量外,还要杜绝因环境的改变而导致的表达调控的变化),放入RNase-free的带螺纹旋盖的管中(不建议将样品直接保存于密封袋或者不带螺纹旋盖的EP管中,因密封袋经过液氮速冻后,变脆易破裂,容易导致样品交叉污染;不带螺纹旋盖的EP管容易渗入液氮,导致管内体积膨胀爆管),-80℃低温保存,用干冰运输。 

组织样品离开活体后,建议在3min内进行液氮速冻,速冻前操作时间越长,RNA降解的可能性越大。 

如果使用RNAlater®一类商业组织RNA保护试剂保存组织样品,请严格按照相应产品使用说明进行操作。尽量使组织块尺寸保持在5mm左右,过小不利于样本回收,过大则保护液不能很快渗透到组织细胞内而达不到保护的效果。 

如果使用TRIzol裂解液保存送样,请务必先进行液氮研磨破碎,然后溶于TRIzol中,小于100mg组织可加入1mL TRIzol裂解,组织样品切勿过量,常温裂解5 min后,-80℃低温保存,干冰运输。 


常用的RNAlater®试剂处理方法

      将组织切成任一方向小于0.5cm的薄片,并浸没于大于5体积的RNAlater®溶液中 (如0.5g样本最少需要2.5mL的RNAlater®溶液)。小的器官如大鼠肾、肝以及脾可整个保存在RNAlater®溶液中。在少量PBS中重悬细胞沉淀,然后加入5–10体积的RNAlater®溶液。 样品在4°C下可保存1个月,25°C下可保存一周,在-20°C下可无限期保存。 记录在–20°C下用RNAlater®溶液处理的组织。 

      用于RNA提取时,只需将组织从RNAlater®溶液中取出,即可按刚收集的组织进行处理。 大多数组织可在裂解缓冲液中直接匀浆处理,但较硬的组织 (如骨骼) 则需要在液氮中冷冻保存并研磨。


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