DNA研究篇(血浆样本)

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用于提取游离DNA的血浆样本,若采用streck管采集保存,常温运输,尽快送至实验室。

注意:不要剧烈震荡或摇晃,以免造成细胞破裂,造成大片段污染。

若为EDTA抗凝管采集,在2小时内完成血浆分离(参照以下血浆处理方法),并转移至-80℃冰箱保存,不得反复冻融。


血浆处理方法:

取出血液样本,对称放于适配器内进行离心,1,600g,4℃离心10min。离心后血液分为三层,上层的是血浆,中间的是白细胞层,下层的是红细胞层,如图所示。 


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用移液器分别吸取血浆、白细胞层、红细胞至不同的冻存管中。

注:白细胞层为极薄的一层,为了不影响白细胞的量,在分离血浆时取至白细胞层以上3-4mm处为宜。在吸取白细胞层时,将上层剩下的血浆及白细胞层以下3-4mm内的红细胞层都吸取。血浆中含有游离核酸,为去除残余细胞中核酸对游离核酸的干扰,应将血浆进行二次离心。将血浆在4℃条件下以16,000 g离心10分钟。

血浆根据后续的实验要求进行分装,每管样本量为单次实验所需的量为宜,如300-500μL /管。 


注意事项: 

1) 推荐EDTA抗凝处理,尽量避免肝素抗凝血,已有研究报道认为高浓度肝素对后续酶学反应有抑制作用,可能会造成检测失败。 

2) 分离血浆的过程尽量在冰上操作,以维持血细胞的完整性。 

3) 整个分离操作应在4小时内完成。


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